In Situ Hybridisierung und Immunhistochemie

Die In-Situ-Hybridisierung (ISH) ermöglicht die hochspezifische Detektion von DNA- oder RNA- (z. Bsp. mRNA, miRNA) Sequenzen. Insbesondere lassen sich hiermit die zeitlichen und räumlichen Expressionsmuster von Genen direkt im Gewebe untersuchen. Mit der Methode der Immunhistochemie (IHC) lassen sich Proteine oder andere Strukturen nachweisen. Beide Techniken werden in vielen unterschiedlichen Forschungsgebieten eingesetzt, wie zum Beispiel in der Entwicklungsbiologie, Molekularbiologie, Genetik, Zellbiologie, Krebsforschung oder Stammzellforschung.
Die offene und flexible Konzeption des Geräts erlaubt die Automatisierung nahezu aller Varianten der oben genannten Methoden, zum Beispiel Immunfluoreszenz (IF), fluoreszente oder chromogene in situ Hybridisierung (FISH / CISH) sowie weitere Färbetechniken (histologische Färbungen, LacZ/X-Gal Färbungen).

Die manuelle Durchführung dieser Experimente ist sehr zeit- und arbeitsintensiv, da die Gewebe in vielen Einzelschritten mit verschiedenen Lösungen behandelt und teilweise bei exakten Temperaturen inkubiert werden müssen.

Der InsituPro Färbeautomat ermöglicht die vollständige Automatisierung dieser Methoden (ISH & IHC), sowohl für die Bearbeitung von Whole-Mounts (Totalpräparate, Gewebestücke, ganze Embryonen) als auch für die Prozessierung von Dünnschnitten auf Slides. Auch adhärente Zellen auf cover-slips können verwendet werden. Das Gerät wird bereits von vielen Forschungsgruppen weltweit für eine Vielfalt unterschiedlicher Organismen verwendet (Maus, Zebrafisch, Huhn, Xenopus, Drosophila, Arabidopsis und viele mehr).

Mit dem CEM InsituPro führen wir die zuvor von der Firma INTAVIS vertriebene InsituPro-Produktlinie fort, welche sich seit mehr als 20 Jahren als Komplettlösung für die vollautomatisierte In-Situ-Hybridisierung und Immunhistochemie von Totalpräparaten (Whole-Mounts), Vibratomschnitten (Floating Sections), Dünnschnitten auf Objektträgern und adhärenten Zellen auf Deckgläschen etabliert hat

Eigenschaften des InsituPro Färbeautomaten

Ein Gerät für alles:

• In-Situ-Hybridisierung (ISH, FISH, CISH), Immunfärbungen (IHC, IF)
  und verwandte Färbetechniken (LacZ/X-Gal, histologische Gewebefärbungen)
• Prozessierung von Totalpräparaten / Whole-Mounts, Vibratomschnitten (schwimmende Gewebeschnitte), Objektträgern und runden Deckgläschen
  (Einfacher Austausch von Modulen für unterschiedliche Applikationen)
• Rückgewinnung von Sonden und Antikörpern
• Offenes System:
  Geringe laufende Kosten durch die Verwendung von Standard-Laborpuffern
• Kompakte Abmessungen – passt auf einen Standard-Labortisch
• Flexible Software:
  Einfache Anpassung individueller, anwenderspezifischer Protokolle
• Etabliertes System:
  20 Jahre Erfahrung, mehr als 300 weltweite Anwender
• Bewährte Protokolle für eine Vielzahl unterschiedlicher Modellorganismen
• Fortgeschrittene Protokolle, z.B. LNA-basierte miRNA Detektion, TSA-Signalverstärkung

Neben der Verwendung von Standard-Laborpuffern und laboreigenen Protokollen, erlaubt der InsituPro auch die Anpassung kommerzieller Kits verschiedener Hersteller (z.B. TSA Tyramide Signal Amplification, RNAscope Multiplex Fluorescent Assay, HCR Hybridization Chain Reaction Multiplexing).

• Rehydrierung
• Gewebe-Permeabilisierung (z.B. mit Proteinase K oder Detergenzien)
• Gewebe-Fixierung
• Prähybridisierung
• Hybridisierung mit individuellen Sonden
• Blockierungsschritte
• Antikörperinkubation mit individuellen Antiköpern
• Posthybridisierung
• Waschschritte

• Individuelle Behandlung einzelner Objektträger oder Totalpräparate
  (z.B. unterschiedliche Sonden oder Antikörper, unterschiedliche Proteinase-Behandlung)
• Puffer-Heizung (z.B. für Posthybridisierungslösungen)
• Temperatur frei einstellbar für jeden einzelnen Schritt
• Anschlüsse für große Puffer-Gefäße (z.B. für PBST oder TBST Waschpuffer)
• Konstante Kühlung für individuelle Sonden oder Antikörper
• Intuitive Steuerungssoftware zur einfachen Modifizierung individueller Protokolle
  (Protokolle können auf jedem externen Windows-PC bearbeitet werden)
• Einfaches Wechseln der Whole-Mount und Slide Module in wenigen Sekunden:

Da die zu bearbeitenden Organismen und Gewebe in Bezug auf Form und Größe stark variieren, sind für den Automaten unterschiedliche Konfigurationen verfügbar. Jedes Modul für die verschiedenen Geräte-Konfigurationen wird als ein komplettes Set geliefert, zu dem die Heiz-/Kühleinheit für Whole-Mounts oder Slides gehören, sowie der passende Multiwell-Aufsatz für die jeweilige Größe von Inkubationskörbchen, alles erforderliche Zubehör sowie ein Laptop-PC und die Steuerungssoftware. Der Wechsel zwischen verschiedenen Konfigurationen nimmt nur wenige Sekunden in Anspruch.

Der InsituPro wird durch eine anwenderfreundliche Windows-basierte Software gesteuert. Eine grafische Benutzeroberfläche zeigt das Layout der Arbeitsfläche, das Ablauf-Protokoll und andere wichtige Parameter. Standard Protokoll-Vorlagen erleichtern die individuelle Anpassung kundenspezifischer, manueller Protokolle. Mit wenigen Klicks und durch Kopieren/Einfügen können auch sehr komplexe Protokolle in wenigen Minuten adaptiert werden.

Auf dem SDB-Meeting im Juli 2ß24 in Atlanta wurde auf einem Poster der Einsatz des InsituPro zur Automatisierung der HCR™-FISH Methode an Zebrafisch Whole-Mount Präparaten gezeigt (Whole-Mounts ISH).
Die HCR Methode zur in situ Hybridisierung, die von der Firma Molecular Instruments angeboten wird, ermöglicht hervorragende Resultate und wurde auf dem Meeting in vielen Talks und Postern präsentiert. Der gesamte Ablauf lässt sich mit unserem InsituPro automatisieren.